Kiel determini la optimuman koncentriĝon?
Por la induktilo IPTG (isopropil-beta-d-tiogalaktozido), ju pli alta la koncentriĝo, des pli bone.La optimuma koncentriĝo dependas de la specifaj eksperimentaj kondiĉoj kaj la dezirata indukta efiko.
Ĝenerale, la koncentriĝo de IPTG estas uzata en la intervalo de 0,1-1 mM.Pli malaltaj koncentriĝoj povas redukti malutilojn sur ĉelkresko kaj povas redukti citotoksecon pro troesprimo de celproteinoj.Pli altaj koncentriĝoj povas kaŭzi troan ĉelan metabolan ŝarĝon, influante ĉelan kreskon kaj espriman efikecon.
La maniero determini la optimuman koncentriĝon povas esti taksi la esprimnivelon de la celproteino farante IPTG-induktotestojn ĉe malsamaj koncentriĝoj.Malgrand-skalaj kulturtestoj povas esti faritaj uzante gamon da IPTG-koncentriĝoj (ekz. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ktp.) kaj la esprima efiko ĉe malsamaj koncentriĝoj povas esti taksita detektante la esprimnivelon de la celproteino (ekz. Okcidenta. makulo aŭ fluoreskeca detekto).Laŭ la eksperimentaj rezultoj, la koncentriĝo kun la plej bona esprima efiko estis elektita kiel la optimuma koncentriĝo.
Krome, vi ankaŭ povas raporti al la koncerna literaturo aŭ la sperto de aliaj laboratorioj por kompreni la komune uzatan IPTG-koncentriĝon sub similaj eksperimentaj kondiĉoj, kaj poste optimumigi kaj ĝustigi laŭ la eksperimentaj bezonoj.
Gravas noti, ke la optimuma koncentriĝo povas varii depende de malsamaj esprimsistemoj, celproteinoj kaj eksperimentaj kondiĉoj, do plej bone estas optimumigi laŭkaze.
Afiŝtempo: Sep-28-2023