Ditiotreitolo (DTT) estas ofte uzata reduktanta agento, ankaŭ konata kiel la nova verda aldonaĵo.Ĝi estas malgranda molekula organika substanco kun du mercaptan grupoj (-SH).Pro ĝiaj reduktantaj trajtoj kaj stabileco, DTT estas vaste uzita en biokemio kaj molekula biologia eksperimentoj.
La ĉefa rolo de DTT estas redukti disulfidobligaciojn en proteinoj kaj aliaj biomolekuloj.La disulfida ligo estas grava parto de proteina faldado kaj stabileco, sed sub certaj eksperimentaj kondiĉoj, kiel reduktebla analizo de SDS-PAGE, proteina rekombinigo kaj faldado, necesas redukti la disulfidan ligon al du tiolgrupoj por malimpliki la spacan strukturon de. la proteino.DTT povas reagi kun disulfidobligacioj por redukti ilin al mercaptan grupoj, tiel malfermante la spacan strukturon de la proteino kaj faciligante analizi kaj manipuli.
DTT ankaŭ povas esti uzata por protekti enzimaktivecon kaj stabilecon.En kelkaj enzim-katalizitaj reagoj, la agado de la enzimo povas esti reduktita per la oksidanto.DTT povas reagi kun oksidantoj por redukti ilin al sendanĝeraj substancoj, tiel protektante la aktivecon kaj stabilecon de la enzimo.
Kompare al tradiciaj reduktantaj agentoj kiel ekzemple β-mercaptoethanol (β-ME), DTT estas konsiderita kiel pli sekura kaj pli stabila reduktanta agento.Ĝi ne nur estas stabila en akva solvaĵo, sed ankaŭ konservas siajn reduktajn proprietojn sub alta temperaturo kaj acid-bazaj kondiĉoj.
La uzo de TDT estas relative simpla.Ĝenerale, DTT estas dissolvita en taŭga bufro kaj tiam aldonita al la eksperimenta sistemo.La optimuma koncentriĝo de DTT devas esti determinita laŭ la specifa eksperimento, kaj estas ĝenerale uzata en la intervalo de 0.1-1mM.Pli malaltaj koncentriĝoj povas redukti malutilojn sur ĉelkresko kaj povas redukti citotoksecon pro troesprimo de celproteinoj.Pli altaj koncentriĝoj povas kaŭzi troan ĉelan metabolan ŝarĝon, influante ĉelan kreskon kaj espriman efikecon.
La maniero determini la optimuman koncentriĝon povas esti taksi la esprimnivelon de la celproteino farante IPTG-induktotestojn ĉe malsamaj koncentriĝoj.Malgrand-skalaj kulturtestoj povas esti faritaj uzante gamon da IPTG-koncentriĝoj (ekz. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ktp.) kaj la esprima efiko ĉe malsamaj koncentriĝoj povas esti taksita detektante la esprimnivelon de la celproteino (ekz. Okcidenta. makulo aŭ fluoreskeca detekto).Laŭ la eksperimentaj rezultoj, la koncentriĝo kun la plej bona esprima efiko estis elektita kiel la optimuma koncentriĝo.
Krome, vi ankaŭ povas raporti al la koncerna literaturo aŭ la sperto de aliaj laboratorioj por kompreni la komune uzatan IPTG-koncentriĝon sub similaj eksperimentaj kondiĉoj, kaj poste optimumigi kaj ĝustigi laŭ la eksperimentaj bezonoj.
Gravas noti, ke la optimuma koncentriĝo povas varii depende de malsamaj esprimsistemoj, celproteinoj kaj eksperimentaj kondiĉoj, do plej bone estas optimumigi laŭkaze.
Resume, DTT estas ofte uzata reduktanta agento, kiu povas esti uzata por redukti disulfidajn ligojn en proteinoj kaj aliaj biomolekuloj kaj por protekti enzimaktivecon kaj stabilecon.Ĝi estis vaste uzita en biokemio kaj molekula biologia eksperimentoj.
Afiŝtempo: Sep-28-2023