4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranosido CAS:200422-18-0

Efiko: ONPG estas substrato specife uzata por detekti la ĉeeston kaj aktivecon de la enzimo β-galaktozidazo. Kiam la enzimo β-galaktozidazo ĉeestas kaj estas aktiva, ĝi disfendas ONPG en du produktojn: o-nitrofenolon kaj galaktozan derivaĵon. La liberigo de o-nitrofenolo rezultas en flava kolorŝanĝo, kiun oni povas mezuri per spektrofotometro.

Apliko: ONPG havas plurajn aplikojn en molekula biologio kaj biokemia esplorado:

Determino de β-galaktozidaza aktiveco: ONPG estas ofte uzata por mezuri kaj kvantigi la aktivecon de β-galaktozidaza enzimo. La rapido de o-nitrofenola formiĝo, kiu estas rekte proporcia al la enzima aktiveco, povas esti mezurita spektrofotometrie.

Genekspresio kaj reguligo: ONPG ofte estas uzata en eksperimentoj rilataj al genekspresio kaj reguligstudoj. Ĝi estas ofte uzata en fuziaj proteinaj analizoj, kiel ekzemple la ofte uzata lacZ-fuzia sistemo, por studi la esprimon de genoj sub la kontrolo de specifaj reklamantoj. La beta-galaktozidaza aktiveco mezurita per ONPG provizas komprenojn pri la nivelo de genekspresio.

Rastrumo por β-galaktozidaza aktiveco: ONPG povas esti uzata kiel kolorimetria rastrummetodo en rekombinita DNA-teknologio por identigi la ĉeeston kaj funkciecon de la LacZ-geno, kiu ĉifras β-galaktozidazon. Ĉi tiu rastrummetodo helpas identigi klonojn, kiuj enhavas la interesatan genon.

Studoj pri enzima kinetiko: ONPG ankaŭ utilas por studi la kinetikon de β-galaktozidaza enzimo. Mezurante la rapidon de enzimo-substrata reakcio ĉe malsamaj substrataj koncentriĝoj, eblas determini kinetikajn parametrojn kiel ekzemple konstantojn de Michaelis-Menten (Km) kaj maksimumajn reakciajn rapidojn (Vmax).