Ĉirkaŭ ni estas multaj nekantataj herooj, kiuj ŝajnas ordinaraj, sed fakte ili silente multe kontribuas al ni. Proteinazo K estas la "nekanta heroo" en la molekula diagnoza industrio, kvankam kompare kun la "grandaj kaj potencaj" en la industrio, proteinazo K estas tiel modesta, ke ni longe preteratentis ĝian gravecon. Kun la eksplodo de la nova krona epidemio, la postulo je proteinazo K ŝvebis, kaj la provizo hejme kaj eksterlande estas multe malantaŭ la konsumo, kaj ĉiuj subite rimarkis, ke proteinazo K estas tiel grava.
Kio estas la uzo de proteinazo K?
Proteinazo K estas serina proteazo kun proteolitika enzima aktiveco kaj povas konservi aktivecon en vasta gamo de medioj (pH (4-12.5), bufro kun alta salo, alta temperaturo de 70°C, ktp.). Krome, la aktiveco de proteinazo K ne estas inhibiciita de SDS, ureo, EDTA, guanidina hidroklorido, guanidina izotiocianato, ktp., kaj certa kvanto da lesivo ankaŭ povas plifortigi la aktivecon de proteinazo K. En medicina traktado (virusa kaj mikroba desinfektado), manĝaĵoj (viandomoligado), ledo (harmoligo), vinfarado (alkohola klarigo), aminoacida preparado (degraditaj plumoj), nukleaacida ekstraktado, en situ hibridigo, ktp., proteinazo K havas aplikojn. La plej ofte uzata apliko estas nukleaacida ekstraktado.
Proteinazo K povas enzimigi ĉiajn proteinojn en la specimeno, inkluzive de tiuj histonoj, kiuj estas forte ligitaj al nukleaj acidoj, tiel ke la nukleaj acidoj povas esti liberigitaj el la specimeno kaj liberigitaj en la ekstrakton, faciligante la sekvan paŝon de ekstraktado kaj purigo. En la detekto de virusa nuklea acido, proteinazo K estas unu el la gravaj komponantoj en la virusa specimeniga solvaĵo. Proteinazo K povas fendi kaj inaktivigi la tegaĵproteinon de la viruso, kio estas pli sekura dum la transporta kaj detekta stadioj; krome, proteinazo K ankaŭ povas degradi RNazon, kiu malhelpas la degeneron de virusa RNA kaj faciligas la detekton de nukleaj acidoj.
La subita famo de proteinazo K
Ĉu en la kampo de scienca esplorado aŭ en la kampo de IVD, nukleaacida ekstraktado estas la plej baza eksperimento, do proteinazo K ĉiam estis tre grava ekzisto. Tamen, en la pasinteco, proteinazo K estis multe malpli konata ol ĝia rolo. Granda parto de tio estis ĉar la rilato inter provizo kaj postulo de proteinazo K estis tre stabila. Malmultaj homoj pensus, ke la provizo de proteinazo K estus problemo.
Kun la eksplodo de la nova kronvirusa epidemio, la postulo je nukleacidaj testoj altiĝis. Ĝis la fino de junio 2020, Ĉinio kompletigis preskaŭ 90 milionojn da novaj krontestoj, kaj ĉi tiu nombro estas eĉ pli alarma je tutmonda skalo. En nukleacidaj ekstraktaj eksperimentoj, la funkcia koncentriĝo de proteinazo K estas ĉirkaŭ 50-200 μg/mL. Ĝenerale, necesas ĉirkaŭ 100 μg da proteinazo K por ekstrakti specimenon de nuklea acido. En la fakta uzo, por pliigi la efikecon de nukleacida ekstraktado, ofte Proteinazo K estas uzata en pliigita kvanto. Nukleacida detekto de la nova koronaviruso alportis grandan kvanton da postulo pri proteinazo K. La originala ekvilibro inter provizado kaj postulo de proteinazo K rapide rompiĝis, kaj proteinazo K fariĝis grava materialo por preventi epidemion subite.
Malfacilaĵoj en la produktado de proteinazo K
Kvankam kun la disvolviĝo de la epidemio, la grava valoro de proteinazo K estas aprezata de homoj, estas embarase, ke pro la troa modesteco de proteinazo K, malmultaj hejmaj kompanioj okupiĝas pri la produktado de proteinazo K. Kiam homoj volas establi produktadon de proteinazo K. Dum la produktada procezo, oni malkovris, ke proteinazo K estas ekstreme speciala proteino. Estas ekstreme malfacile vastigi la produktadkapaciton de proteinazo K en mallonga tempodaŭro.
La grandskala produktado de proteinazo K alfrontas la jenajn malfacilaĵojn
1. Malalta esprimo
Proteinazo K povas nespecife degradi plej multajn proteinojn kaj kaŭzi gravan toksecon al la esprima gastiga ĉelo. Tial, la esprima nivelo de proteinazo K estas ĝenerale tre malalta. Rastrumo de esprimaj sistemoj kaj trostreĉoj, kiuj alte esprimas proteinazon K, ĝenerale postulas pli longan ciklon.
2. Restaĵoj de pigmentoj kaj nukleaj acidoj
Grandskala fermentado enkondukas grandan kvanton da pigmento kaj restaĵoj de la gastiga nukleacido. Estas malfacile forigi ĉi tiujn malpuraĵojn per simpla puriga procezo, kaj kompleksa purigo pliigas la koston kaj malpliigas la reakiran indicon.
3. Malstabileco
Proteinazo K ne estas sufiĉe stabila, ĝi povas enzimi sin mem, kaj malfacilas konservi ĝin stabile je 37 °C dum longa tempo sen protekta agento.
4. Facile precipitaĵebla
Dum preparado de la liofiligita pulvoro de proteinazo K, por certigi, ke la solida enhavo de proteinazo K en la liofiligita pulvoro estas granda, necesas aldoni liofiligitan protektan agenton je alta koncentriĝo, sed kiam la koncentriĝo de proteinazo K atingas 20mg/mL kaj pli, estas facile, ke la agrego formas precipitaĵon, kio alportas grandajn malfacilaĵojn al la liofilizado de proteinazo K kun alta solida enhavo.
5. Granda investo
Proteinazo K havas fortan proteazan agadon kaj povas hidrolizi aliajn proteazojn en la laboratorio. Tial, proteinazo K postulas specialigitajn produktadareojn, ekipaĵon kaj personaron por esplorado, disvolviĝo kaj produktado.
Proteinaza K-solvaĵo de XD BIOCHEM
XD BIOCHEM havas maturan platformon por proteina esprimo kaj purigo, kaj havas riĉan sperton pri la esprimo kaj purigo de rekombinitaj proteinoj kaj optimumigo de produktadaj procezoj. Per la rapida formado de esplora kaj evoluiga teamo, la grandskala produktada procezo de proteinazo K estis superita. La monata produktado de liofiligita pulvoro estas pli ol 30 KG. La produkto havas stabilan funkciadon, altan enzim-specifan agadon, kaj neniujn restaĵojn de gastigaj citokromo kaj nukleacido. Bonvenon kontakti XD BIOCHEM. Akiru provan pakaĵon (Retpoŝto:sales@xdbiochem.comTelefono: +86 513 81163739).
La teknikaj solvoj de XD BIOCHEM inkluzivas
Uzante plurkopian plasmidan integriĝon, alt-esprimaj trostreĉoj kun esprimnivelo de 8g/L estas selektitaj, kio solvas la problemon de malalta esprimnivelo de proteinazo K.
Per la establado de plurpaŝa purigprocezo, la gastigaj citokromo- kaj nukleaacidaj restaĵoj de proteinazo K estis sukcese forigitaj sub la norma valoro.
Per alt-traira rastrumo de protektaj bufroformuloj, bufro kiu povas stabile stoki proteinazon K je 37 °C estis elektita.
Rastrumaj bufroj supervenkas la problemon, ke proteinazo K facile agregiĝas kaj precipitas ĉe altaj koncentriĝoj, kaj metas la fundamenton por la liofilizado de proteinazo K kun alta solida enhavo.
XD BIOCHEM proteinazo K specimeno
Testo pri stabileco de proteinazo K de XD BIOCHEM: ne estos signifa ŝanĝo en aktiveco post 80 tagoj je ĉambra temperaturo
Testo pri stabileco de proteinazo K de XD BIOCHEM: post 80 tagoj je ĉambra temperaturo ne estos signifa ŝanĝo en aktiveco.
Komparo de la nukleaacida ekstraktado-efiko de XD BIOCHEM proteinazo K kaj konkurencaj produktoj. En la procezo de nukleaacida ekstraktado, XD BIOCHEM kaj konkurenca proteinazo K estas uzataj respektive. La ekstrakta efikeco de XD BIOCHEM proteinazo K estas pli alta kaj la Ct-valoro de la cela geno estas pli malalta.
Afiŝtempo: 31-a de decembro 2021